Direkte antiglobulintest

Antiglobulintest, også referert til som Coombs test, er en hyppig benyttet diagnostisk verktøy som brukes for deteksjon av immunohematological og immunologiske lidelser. Basert på teknikken og mål, er det to varianter av antiglobulintest tester: den direkte antiglobulintest (DAT) / direkte Coombs test (DCT), og den indirekte antiglobulintest (IAT). Det er viktig å nevne at direkte antiglobulintest benyttes til å detektere en spesiell type anemi som er forårsaket av unormal funksjon av immunsystemet. Menneskekroppen er utstyrt til å produsere antistoffer for å identifisere og angripe fremmede patogener. Men i noen tilfeller, immunsystemet syntetisere antistoffer som er rettet mot og drepe røde blodceller (eller RBC i kroppen vår) å forårsake hemolytisk anemi.

Når trenger du å ta en direkte antiglobulintest?

Når legen er ikke sikker på om antistoffene er festet til RBC, kan direkte antiglobulintest hjelpe i en slik situasjon. Vanlige situasjoner der legen kan anbefale direkte antiglobulintest inkluderer: post-transfusjons indikasjoner på hemolytisk anemi og noen ganger diagnostisering nyfødte hvis mor har utviklet antistoffer mot fosterets RBC og gikk det videre til barnet under intrauterine liv. Hvis venstre uoppdaget, sjansene for å utvikle livstruende tilstander som hemolytisk sykdom hos den nyfødte øker betraktelig.

Hemolyse er vanligvis på grunn av hyperactivation av immunsystemet som fører til dannelsen av antistoffer mot kroppens egne RBC-er, som også er kjent som autoimmun hemolytisk anemi. Og symptomer kan inneholde:

• Puste-
• Mangel på energi og økt følelse av tretthet
• Mørk farget urin og gulsott
• Lav RBC teller på blodprøver
• Kalde ekstremiteter, inkludert hender og føtter
• Hjerte problemer som hjerte knurrer eller fiasko, og uregelmessig hjerte

Hvordan er den direkte antiglobulintest utført?

Arbeidsprinsippet DAT

Direkte antiglobulintest hjelper til å oppdage den vivo antistoffbelegg av røde blodceller (antistoffene kan være IgG eller komplimentet eller begge deler). I blodstrømmen, RBC-er har visse antigener som gir festesteder til antistoffer. Enhver trigger eller respons som kan aktivere disse festesteder kan stimulere symptomer på hemolytisk anemi. Dette er grunnlaget for HDN (hemolytisk sykdom hos nyfødte), autoimmun hemolytisk anemi og transfusjonsreaksjon. Aktiveringen og belegget kan også oppstå på grunn av visse medisiner.

I denne testen, røde blodceller ble vasket og deretter inkubert med humant serum. Denne teknikken gjør det mulig for antistoffer for å få binde seg til antigener på RBC. Prosessen involverer deretter vask og tilsetning av anti-humant immunglobulin. Dersom agglutinasjon oppstår etter tilsetning av anti-human globulin (noen ganger referert til som Coombs-reagens), så er det et tegn på antistoffbelegg over cellene in vivo. Det er viktig å nevne at både IgG- og IgM-antistoffer kan påvises ved hjelp av denne testen.

Teknikker for DAT

1. Ta pasient RBC fra en EDTA (etylendiamintetraeddiksyre), som sikrer at prøven er antikoagulert.
2. Unnlate en dråpe av RBC-suspensjon (2% -5%), hver for seg i hver av de 4 reagensrør, og merke de 4 rør med tagger: Poly, kontroll, anti-IgG og anti-C3.
3. Vask RBC-ene med saltløsning, og deretter vippe røret opp ned for å dekantere i salin. Deretter fjerner bunnen av rørene med den venstre saltvann, og gjenta dette for 3 til 4 ganger. Tørk til rørene med absorberende kompressor.
4. Legg til to dråper polyspesifikt AHG inn "poly" rør, og dispenserings to dråper 6% BSA til "Kontroll" rør.
5. Rist forsiktig for å kombinere innholdet i rørene, og RBC-ene i hvert rør vil danne en pellet eller en knapp som skal bli testet for agglutinering. Registrere resultatene.
6. Dersom polyspesifikt reagensen viser positive resultater, vil spesifikke tester med anti-IgG-anti-C3-reagenser være nødvendig for å identifisere cellen belegg, enten det er antistoff eller komplement eller begge deler.
7. Dispenser 2 dråper anti-IgG AHG til "anti-IgG" rør, og 2 dråper anti-C3 AHG til "anti-C3" rør. Rist for å kombinere innholdet.
8. Testen må være meget følsomme, slik vi skal ha inkubere alle negativene i 5 minutter for bedre belegg. For å detektere svakheter i belegget, observere alle negativer med mikroskop.
9. Hvis rød topp rør har blitt brukt for å samle prøven, så falske positive resultater kan komme.

• Når koagulering skjer eller den kjøles ned, er det på grunn av svakhet i kaldvirkende auto-antistoffer, inkludert anti-I, foregår den tilstand i In-Vitro komplement.
• Unngå lavendel-topprøret for å binde kalsium- og magnesiumioner.
• Unngå aktivering av komplement in vitro.

10. I tilfelle av positiv DAT, få følgende informasjon om pasienten:

• Diagnostikk av visse sykdommer
• riktig medisinering
• History of transfusjon av røde blodceller og komponenter til plasma
• Andre tester som indikerer ødeleggelser i RBC

For mer informasjon om DAT og IAT, se videoen nedenfor:

Hvordan du skal tolke testresultatene

Vi vet at antistoffer feste til RBC når DAT er positive. Omfanget av positivitet avhenger av styrken av DAT og samtidig mengden av bundet antistoff. Men hvis RBC er allerede ødelagt, denne situasjonen ikke alltid forholder seg til alvorlighetsgraden. I direkte antiglobulintest, blir antistoffer påvises uten å identifisere årsaken og typen av hemolytisk anemi. For å finne ut årsakene bak det, trenger medisinsk historie for å bli observert og medisinsk eksamen skal gjennomføres, for eksempel historien om transfusjon, narkotika reaksjon, etc.

Det er viktig å nevne at en liten del av befolkningen tester DAT positiv uten å oppleve eller manifestere noen tegn på hemolytisk anemi. Hvis DAT er negativ, tyder det på at antistoffer ikke er bundet til RBC-er. Derfor kan andre årsaker bli detektert og undersøkt.

Noen situasjoner der DAT er positivt er:

• Autoimmun hemolytisk anemi (på grunn av hyperaktivitet av immunsystemet mot RBC)
• Utvikling av antistoffer på RBC, er tilstanden kalles "legemiddeltoksisitet". Den forårsakes av enkelte legemidler som inkluderer cefalosporiner, levopoda, dapson, nitrofurantion, NSAIDs som ibuprofen
• Når donert blod angripes av immunsystemet (som en del av transfusjonsreaksjon)
• Blod typer mor og spedbarn er forskjellige
• Leukemi inkludert kronisk lymfatisk leukemi
• En autoimmun problem som kalles lupus
• mononukleose
• syfilis
• Mycoplasma infeksjon.

Noen ganger resultatene av direkte antiglobulintest kan være umulig selv uten noen sykdom eller risiko. Dessuten kan testen bli avbrutt av enkelte legemidler, og noen kan føre til at resultatene positive uten hemolytisk anemi. Enkelte medikamenter som kan forårsake hemolytisk anemi er:

• noen antibiotika
• Insulin
• Noen spesiell blodtrykk medisiner